在細胞生物學研究、生物制藥等眾多領域，細胞株的遺傳穩(wěn)定性至關重要。STR分析法作為一種強有力的工具，能夠有效地對細胞株的遺傳穩(wěn)定性進行監(jiān)測。

　　STR即短串聯(lián)重復序列，是廣泛分布于人類基因組中的一類高度多態(tài)性的遺傳標記。其核心原理在于，這些短串聯(lián)重復序列的重復單元數(shù)量在不同個體或細胞株中存在差異。在利用STR分析法監(jiān)測細胞株遺傳穩(wěn)定性時，首先要從細胞株中提取高質(zhì)量的基因組DNA。這一提取過程需要嚴格遵循標準化的實驗操作流程，以確保所提取DNA的純度、完整性和濃度符合后續(xù)分析要求。例如可采用經(jīng)典的酚-氯仿抽提法或商業(yè)化的DNA提取試劑盒，后者因其操作簡便、高效且能有效減少污染而被廣泛應用。

　　提取到DNA后，針對特定的STR位點進行PCR擴增。選擇合適的STR引物是關鍵步驟，這些引物應能夠特異性地結合到目標STR位點的側翼序列，從而在PCR反應中高效地擴增出相應的STR片段。PCR反應體系的優(yōu)化也不容忽視，包括反應緩沖液的組成、Taq酶的活性、dNTP的濃度以及引物的用量等，都需要經(jīng)過精心調(diào)試，以保證擴增反應的特異性、靈敏度和重復性。

　　擴增完成后，對PCR產(chǎn)物進行電泳分離和檢測。常用的檢測方法有毛細管電泳法，它能夠精確地分離不同長度的STR片段，并通過檢測其熒光信號強度來確定各STR片段的相對含量。在毛細管電泳圖譜中，每個STR位點會呈現(xiàn)出特定的峰型，峰的位置對應著STR片段的長度，峰的高度或面積則反映了該STR片段的相對豐度。

　　通過比較不同傳代次數(shù)細胞株的STR圖譜，可判斷細胞株的遺傳穩(wěn)定性。如果在傳代過程中，細胞株的STR圖譜保持基本一致，即各個STR位點的峰型、峰位和峰面積沒有明顯變化，那么說明該細胞株具有較好的遺傳穩(wěn)定性。反之，如果出現(xiàn)新增峰、峰的位移或峰面積顯著改變等異常情況，則提示細胞株可能發(fā)生了遺傳變異，如基因突變、染色體畸變或外源基因整合等。

　　在生物制藥領域，利用STR分析法監(jiān)測細胞株遺傳穩(wěn)定性尤為重要。如在生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞株培養(yǎng)過程中，遺傳穩(wěn)定性的保持直接關系到抗體的質(zhì)量和產(chǎn)量。通過定期對細胞株進行STR分析，能夠及時發(fā)現(xiàn)并排除遺傳不穩(wěn)定的細胞株，確保生產(chǎn)用細胞株始終保持優(yōu)良的遺傳特性，從而為生物制藥的質(zhì)量控制提供堅實的保障。

　　STR分析法憑借其高靈敏度、高分辨率和良好的重復性，成為監(jiān)測細胞株遺傳穩(wěn)定性的重要手段，在細胞生物學研究和生物制藥等領域發(fā)揮著重要的作用，有助于推動相關領域的科學研究和產(chǎn)業(yè)發(fā)展朝著更加精準、高效的方向邁進。

上一篇 : 細胞株購買后是否需要離心置換出DMSO？    下一篇 :  細胞株連續(xù)傳代有哪些明顯的標志？

>> 返回首頁