MRD是指治療后體內(nèi)殘留的腫瘤細(xì)胞或者標(biāo)志物，通常的翻譯有3種，微小殘留病灶（Minimal Residual Disease）、可檢測(cè)殘留病灶（Measurable Residual Disease）、分子殘留病灶（Molecular Residual Disease）。

微小殘留病灶（Minimal Residual Disease）一詞最早是出現(xiàn)在血液瘤中，是指治療后殘留的腫瘤細(xì)胞很少，很微小，常規(guī)檢測(cè)的靈敏度不足以檢測(cè)到，一般是由于藥物不應(yīng)答、藥物耐藥等等原因，因此此時(shí)MRD的檢測(cè)可以是分子檢測(cè)（比如NGS），可以是表面標(biāo)志物檢測(cè)（比如NGF）。而可檢測(cè)殘留病灶（Measurable Residual Disease）則側(cè)重于可檢測(cè)到的角度，對(duì)殘留病灶的研究限于可以檢測(cè)到的前提下，而后的分子殘留病灶（Molecular Residual Disease）主要是指分子診斷可以檢測(cè)腫瘤的殘留，主要是通過對(duì)ctDNA的檢測(cè)，這個(gè)時(shí)候適用于血液瘤和實(shí)體瘤。

MRD是腫瘤耐藥、復(fù)發(fā)的重要因素，是預(yù)后判斷的重要指標(biāo)。在2021年版非小細(xì)胞肺癌MRD檢測(cè)的專家共識(shí)中，有一段描述：在一項(xiàng)前瞻性多中心研究中，共入組101例帶有體細(xì)胞突變的早期乳腺癌患者，通過dPCR動(dòng)態(tài)追蹤術(shù)后血漿ctDNA，結(jié)果提示ctDNA陽性與患者疾病復(fù)發(fā)明確相關(guān)【風(fēng)險(xiǎn)比HR=25.2，95%可信區(qū)間CI 6.7-95.6， p<0.001】，且ctDNA較影像學(xué)提前預(yù)示疾病復(fù)發(fā)，中位10.7個(gè)月（95% CI 8.1-19.1個(gè)月）。另一項(xiàng)入組130例II-III期結(jié)腸癌的多中心隊(duì)列研究中，通過多重PCR捕獲的NGS監(jiān)測(cè)患者切除術(shù)后ctDNA狀態(tài)，結(jié)果提示術(shù)后30天ctDNA陽性患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)遠(yuǎn)高于陰性患者（HR=17.5，95% CI 5.4-56.4，p<0.001）。

ctDNA的MDR檢測(cè)現(xiàn)狀

現(xiàn)有的針對(duì)ctDNA的MRD檢測(cè)主要有2條技術(shù)路線：tumor-agnostic -assays(腫瘤未知分析)和tumor-informed assays(腫瘤知情/先驗(yàn)分析)，其中tumor-agnostic -assays僅對(duì)血漿檢測(cè)，利用的是固定的panel（一般為驅(qū)動(dòng)基因和靶向藥物基因，也會(huì)多組學(xué)方法）和分析方法對(duì)ctDNA做檢測(cè)，做分析，代表產(chǎn)品Guardant Health公司的Guardant Reveal；tumor-informed assays需要對(duì)原發(fā)腫瘤組織進(jìn)行測(cè)序（一般為WES），來鑒定患者的特異基因組變異圖譜，然后再定制個(gè)性化的panel，針對(duì)ctDNA做檢測(cè)，也就是說需要對(duì)組織和血漿都做檢測(cè)，代表產(chǎn)品為Natera公司的Signatera。國內(nèi)IVD公司對(duì)MRD的檢測(cè)，截至發(fā)稿前，小編遇到的tumor-informed assays為多。

MRD技術(shù)難度很大的一個(gè)方面是對(duì)超低頻突變的檢測(cè)能力和穩(wěn)定性，以非小細(xì)胞肺癌為例，在早期NSCLC患者血漿中位cfDNA的濃度為7.69ng/mL，換算在10mL血漿(20ml全血)中含有大概20,000個(gè)單倍體基因組（3.3pg），考慮到cfDNA建庫時(shí)的損耗以及至少存在2條相同的變異基因序列，10mL血漿中ctDNA檢測(cè)到的極限分子信號(hào)為0.02%水平。另外，從TRACERx研究數(shù)據(jù)推算，在1cm³體積的腫瘤情況下, 10mL血漿中大概含有2條腫瘤來源DNA分子。因此，在NSCLC中進(jìn)行MRD檢測(cè)時(shí)，該檢測(cè)方法必須可穩(wěn)定檢測(cè)出豐度≥ 0.02%的ctDNA。這里有個(gè)重要的技術(shù)策略，就是Sample Level的策略，對(duì)于site level的0.02%甚至更低，可以通過samples Level來提高靈敏度。

科佰生物

針對(duì)ctDNA檢測(cè)的MRD診斷IVD的開發(fā)，少不了的是性能評(píng)價(jià)，自然也是少不了標(biāo)準(zhǔn)品的開發(fā)，科佰生物是一家專注IVD研發(fā)中診斷陽性參考品、檢測(cè)限參考品、精密度參考品的研發(fā)生產(chǎn)型企業(yè)，針對(duì)ctDNA的超低頻標(biāo)準(zhǔn)品的開發(fā)，我們計(jì)劃開發(fā)2類產(chǎn)品（Art-base and Nat-base），希望得到行業(yè)專家更多的建議。

針對(duì)tumor-agnostic-assays的檢測(cè)方法，主要還是滿足不同panel的定制標(biāo)準(zhǔn)品需求，類似與液體活檢ctDNA標(biāo)準(zhǔn)品的定制，可以針對(duì)性的開發(fā)針對(duì)不同癌種的panel組合，這里我們傾向納入小panel、中panel、大panel的差異位點(diǎn)合集，同時(shí)傾向于放入致病和疑似致病的位點(diǎn)，組成合集。首要解決的問題是超低腫瘤占比帶來的超低頻突變的定標(biāo)問題，我們知道dPCR的檢測(cè)限一般為0.1%，低于0.1%的頻率一般很難與陰性相區(qū)分，因此對(duì)于超低頻的位點(diǎn)的檢測(cè)一般是使用超深度的NGS來定標(biāo)，除了血液瘤外，國內(nèi)暫時(shí)沒有其他腫瘤獲批的MRD檢測(cè)試劑盒，很多都是摸著石頭過河的，暫時(shí)無法通過上市的超深度的NGS試劑盒來定標(biāo)，這個(gè)沒有特別好的解決辦法，只能在混樣的稀釋工藝上，盡可能做到準(zhǔn)確和一致。

針對(duì)tumor-informed assays的檢測(cè)方法，按照工藝上的描述，是定制類的標(biāo)準(zhǔn)品開發(fā)，首先針對(duì)待測(cè)樣本組織開展WES檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果設(shè)計(jì)適合超深度ctDNA檢測(cè)的panel，比如捕獲法的話，重點(diǎn)在優(yōu)化探針的性能，同時(shí)針對(duì)已知的突變開發(fā)對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品。同樣的，也會(huì)遇到超低腫瘤占比帶來的超低頻突變的定標(biāo)問題。在此，科佰生物也是希望能在與探針設(shè)計(jì)合成的公司達(dá)成合作，在復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)的有*效內(nèi)，完成panel的開發(fā)和性能評(píng)價(jià)。

MRD檢測(cè)意義

MRD的檢測(cè)，針對(duì)ctDNA的檢測(cè)已經(jīng)在臨床多種腫瘤復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)中表征出明確的臨床檢測(cè)意義，臨床亟待MRD的檢測(cè)試劑盒，幫忙指導(dǎo)患者的輔助治療，復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)。