淋巴細(xì)胞活化基因3（Lymphocyte-activation gene 3，LAG-3），又稱為CD233，由Triebel等人于1990年發(fā)現(xiàn)。LAG-3是一個Ⅰ型跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白（Ig）超家族，主要表達(dá)在T細(xì)胞和NK細(xì)胞表面。LAG-3基因位于第12號染色體，LAG-3蛋白由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)3個部分組成，LAG-3的胞外區(qū)有4個免疫球蛋白超家族類似（IgSF-like）結(jié)構(gòu)域（D1-D4），D1結(jié)構(gòu)域中有一個環(huán)狀結(jié)構(gòu)，使LAG-3可以與MHC II（major histocompatibility complex II，MHC II）類分子結(jié)合，LAG-3的胞質(zhì)區(qū)由三個部分組成：絲氨酸磷酸化位點、KIEELE元件和谷氨酸脯-氨酸二肽重復(fù)序列（EP repeat），其中KIEELE元件參與了LAG-3下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，是LAG-3調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能所必需的。LAG-3主要配體為組織相容性復(fù)合體II類分子（major histocompatibility complex II，MHC II），此外還可與半乳糖凝集素-3（Galectin-3）、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞凝集素（LSECtin）、FGL1（fibrinogen-like protein1）等相互作用來調(diào)節(jié)T細(xì)胞應(yīng)答。

LAG-3是T細(xì)胞的一個抑制性免疫檢查點,與PD-1和CTLA-4類似，當(dāng)LAG-3與配體結(jié)合時能負(fù)向TCR的活性，調(diào)控T細(xì)胞的增殖、激活、功能和穩(wěn)態(tài)，包括負(fù)向調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的增殖和功能，參與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）抑制性作用。當(dāng)處于腫瘤環(huán)境或慢性感染時，長期的抗原刺激會導(dǎo)致T細(xì)胞LAG-3持續(xù)高表達(dá)，引起T細(xì)胞耗竭（exhaustion）。阻斷LAG-3信號通路能促進(jìn)耗竭T細(xì)胞恢復(fù)功能，調(diào)控T淋巴細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞（APCs）的信號通路，在適應(yīng)性免疫反應(yīng)中起到重要作用，讓T細(xì)胞重新獲得細(xì)胞毒性活性，降低調(diào)節(jié)T細(xì)胞抑制免疫反應(yīng)的功能，從而增強(qiáng)對腫瘤的殺傷效果。因此LAG-3已成為腫瘤免疫治療的一個非常具有潛力的靶點。

LAG3-3靶點藥物研發(fā)現(xiàn)狀

 

LAG-3的靶向藥物目前均處于臨床實驗階段，尚無藥物上市，主要有兩類LAG-3調(diào)節(jié)劑用于治療癌癥和自身免疫性疾病：

 

（1) 可溶性LAG-3重組蛋白（如IMP321），已進(jìn)臨床階段，作為抗原提呈細(xì)胞激活劑增進(jìn)免疫反應(yīng)，也可與化療藥物或免疫抑制劑藥物聯(lián)合使用以加強(qiáng)患者免疫應(yīng)答。

 

（2) LAG-3單抗藥物，目前全球有近30款進(jìn)入臨床試驗，但尚無藥物上市，其中進(jìn)展最快的是BMS的Relatlimab，已完成II/III期臨床研究試驗，達(dá)到了無進(jìn)展生存期（PFS）的主要研究終點，該試驗評估了Relatlimab與Opdivo（納武利尤單抗）聯(lián)合治療先前未經(jīng)治療的轉(zhuǎn)移性或不可切除的黑色素瘤患者的療效和安全性。LAG-3單抗目前主要與其它免疫檢查點抑制（如PD-1單抗）聯(lián)合使用，現(xiàn)有20項NIH在冊針對LAG-3的臨床試驗中有13項與PD-1抑制劑聯(lián)用。
 

LAG-3靶點藥物細(xì)胞篩選模型

針對LAG-3靶點藥物開發(fā)和靶點研究的需求，我們開發(fā)了LAG-3系列藥篩細(xì)胞株。

 LAG3/HEK293 CBP74051


Figure 3. Recombinant HEK293 stably expressing human LAG3.


LAG3/CHO CBP74052


Figure 4. Recombinant CHO cells constitutively expressing human LAG3.

 

LAG3/NFAT-Luc/Jurkat CBP74060

Figure  5.  Detect Luciferase assay by Promega Bright-Glo Luciferase Assay System. Jurkat-NFAT-LAG3-Luciferase Reporter cells were stimulated by Jurkat cells,the EC50 was 0.17μg/ml.

 

LAG3/IL2-Luc/Jurkat CBP74079

Figure 6. Dose Response of Anti-LAG3 Neutralizing Antibody in LAG3/lL2 Promoter Reporter-Jurkat Cells, the EC50=2.99μg/ml.